文章摘要
熊 科;支慧伟;王小艺;赵峙尧;柳佳芸;裴鹏刚;邓 蕾;李秀婷.黑曲霉M00988菌株来源的降解赭曲霉毒素A羧肽酶基因的原核表达及其固定化[J].中国食品学报,2019,19(5):66-75
黑曲霉M00988菌株来源的降解赭曲霉毒素A羧肽酶基因的原核表达及其固定化
  
DOI:
中文关键词: OTA  羧肽酶  重组表达  酶复合固定化
英文关键词: 
基金项目:国家重点研发计划项目(2017YFC1600605);北京自然科学基金项目(6172003);国家自然科学基金项目(31601408)
作者单位
熊 科;支慧伟;王小艺;赵峙尧;柳佳芸;裴鹏刚;邓 蕾;李秀婷 北京工商大学北京食品营养与人类健康高精尖创新中心北京100048北京工商大学北京市食品添加剂工程技术研究中心北京100048北京工商大学北京市风味化学重点实验室北京100048北京工商大学北京市质量与安全重点实验室北京100048 
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中文摘要:
      黑曲霉M00988菌株具有降解赭曲霉毒素A(OTA)的作用。为了提高天然菌株的降解效率,将黑曲霉菌株中解毒的关键羧肽酶cp基因进行克隆,并原核重组表达该酶。通过优化得到最优的表达条件为培养2.5 h后加入1 mmol/L IPTG,诱导温度28 ℃,诱导时间20 h。粗酶液经镍柱纯化后得到解毒能力达30.03 μg/mg的电泳级重组羧肽酶。之后,采用AB-8大孔树脂作为吸附载体,戊二醛为交联剂对酶进行复合固定化,得到最优固定化条件为吸附时间12 h、吸附温度37 ℃、戊二醛质量分数0.35%、交联时间1 h、交联温度25 ℃。固定化酶与游离酶相比,酶对底物的亲和力虽有所下降,但酶促反应最大速度(Vmax)没有显著下降,催化效率基本一致,表明对该酶进行吸附-交联复合固定化效果良好。对固定化前、后酶的二级结构的研究表明:酶经固定化后,α螺旋和无规则卷曲的含量有所上升,β折叠显著下降,β转角变化不明显。这说明酶经固定化后,部分β折叠链内氢键断裂,转变成为无规则结构或α螺旋结构,导致固定化酶对底物的亲和力较之前有所下降,而其Vmax与游离态酶基本一致,因此固定化酶与游离态酶的催化效率基本一致。本研究为羧肽酶降解OTA在工业上的固定化应用奠定了基础。
英文摘要:
      
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