文章摘要
贺稚非; 周泽扬; 李洪军; 高兆建; 宫春波.假单胞菌SP-6胞外弹性蛋白酶基因的克隆与表达[J].中国食品学报,2007,7(6):13-20
假单胞菌SP-6胞外弹性蛋白酶基因的克隆与表达
  
DOI:
中文关键词: 胞外弹性蛋白酶  基因克隆  表达
英文关键词: 
基金项目:
作者单位
贺稚非; 周泽扬; 李洪军; 高兆建; 宫春波 西南大学食品科学学院,重庆,400716
西南大学蚕桑学重点实验室,重庆,400716 
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中文摘要:
      以分离筛选、鉴定的假单胞菌为研究材料,提取假单胞菌的基因组为模板基因,设计引物进行PCR扩增.扩增的条件为94℃预变性4min,98℃变性10 s,58℃退火1min,72℃延伸2min,35个循环,72℃复性10min.用试剂盒回收PCR产物,以PGEM-T Easy Vector为载体,产生重组质粒,转化到大肠杆菌(E.coli)JM109细胞中,于LB平板上进行蓝白筛选阳性克隆.提取阳性克隆的质粒,电泳筛选滞后质粒,EcoRⅠ酶切验证后进行测序,检测弹性蛋白酶基因在JM109 E.coli细胞中的表达.结果表明:PCR扩增出1.67 kb的基因片段,并成功克隆在E.coliJM109细胞中;挑取白斑提取的质粒,检测有滞后质粒,EcoR Ⅰ酶切检测到3.0 kb的载体和1.67 kb的基因片段;以滞后质粒为模板再次进行PCR扩增,扩增出1.67 kb基因片段,证明该质粒为重组质粒,经上海博亚生物技术公司测序为1.67 kb的基因片段,并在E.coliJM109细胞中表达.
英文摘要:
      
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