贝类中诺如病毒SYBR Green I实时定量RT-PCR检测方法研究

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贝类中诺如病毒SYBR Green I实时定量RT-PCR检测方法研究
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基金项目:国家“863”计划项目(2007AA09Z438);; 国家科技支撑项目(2008BAD94B09)

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将诺如病毒(Norovim8es,NV8)RT-PCR特异产物纯化后与pGEM-T裁体连接并转化至感受态细胞DH5α,经测序鏊定.提取阳性克隆质粒DNA,梯度稀释后作为实时荧光定量PCR的标准质粒.使用SYBRGreen I染料建立检测贝类中NV8的实时荧光定量RT-PCR方法.结果表明,本方法标准曲线线性范围可达6个数量级(108～103拷贝),R2为O.9983,比常规RT-PCR方法敏感100倍,且特异性良好,与贝类中的轮状病毒、甲肝病毒均不反应;批内和批间重复性良好,变异系数(CV)分剐在0.28%～4.03%和1.47%～5.53%范围.该方法具有简便、敏感、高效、稳定等优点,可用于水产品中NV8的定量检测.

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引用本文

苏来金；周德庆；马丽萍；曹慧慧.贝类中诺如病毒SYBR Green I实时定量RT-PCR检测方法研究[J].中国食品学报,2009,(6):157-163

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