目的:以罗非鱼加工下脚料肠道为原料,分离提取其中的蛋白酶,并对其部分性质进行研究,旨在提供一种简便的食品级蛋白酶制备方法。方法:用茶多酚络合沉淀,Sephadex G-50分离纯化蛋白酶,SDS-PAGE检测分离效果及相对分子质量;以酪蛋白溶液为底物,采用Folin-酚法测定蛋白酶活力。结果:经茶多酚络合沉淀,得到一种复合蛋白酶,命名为TP-肠道蛋白酶;经Sephadex G-50凝胶层析除去茶多酚,得到游离肠道蛋白酶。TP-肠道蛋白酶的最适温度50℃,pH7.2～9.6,米氏常数Km=1.125×103mg/L;游离肠道蛋白酶的最适温度50℃,pH7.2～10.0,米氏常数Km=8.5×102mg/L。结论:TP-肠道蛋白酶和游离肠道蛋白酶均为复合蛋白酶,有望开发成食品级蛋白酶制剂。