目的:分析藏灵菇源乳酸菌发酵液中的四碳二羧酸,研究发酵条件对合成四碳二羧酸的影响。方法:采用高效液相色谱分析藏灵菇源乳酸菌Tx、KS4、KL1菌株发酵液中的四碳二羧酸,通过四因素三水平[L9(34)]正交试验确定高产四碳二羧酸的发酵条件。结果:发酵液中草酰乙酸含量0.03318 g/L,延胡索酸含量0.05002 g/L,苹果酸含量0.000046 g/L;优化的发酵条件是:乳酸菌Tx、KS4与KL1菌种比例为3:3:3,接种量2%,发酵温度40℃,发酵时间24 h。在此条件下,合成四碳二羧酸含量是优化前的27.25倍,其中,草酰乙酸含量是优化前的41.21倍,延胡索酸含量是优化前的17.08倍,苹果酸含量是优化前的1 001.3倍。结论:在优化的发酵条件下,藏灵菇源乳酸菌混合发酵液中的四碳二羧酸含量明显提高。