试验优化了液态乳胆固醇的皂化条件(皂化时间、温度和皂化试剂添加量),采用高效液相色谱法同时测定乳品中胆固醇、7-脱氢胆固醇和25-羟基胆固醇的含量。结果表明,1 m L液态乳最佳皂化条件:80℃下2.0mL 2 mol/L KOH皂化20 min,液态乳的胆固醇含量为10.824 mg/100g;采用Eclipse plus C18 (4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,以甲醇为流动相,流速0.8 mL/min,在205 nm和227 nm两个波长下分离3种胆固醇,分离效果较好。胆固醇、7-脱氢胆固醇和25-羟基胆固醇分别在0.0967～0.9959 mg/mL、0.0120～0.2011 mg/mL和0.1237～0.1998 mg/mL范围内呈现良好的线性关系(R2=0.9999,R2=0.9996,R2=0.9992);胆固醇、7-脱氢胆固醇和25-羟基胆固醇的精密度试验RSD分别为0.619%,3.562%,1.696%;稳定性试验RSD分别为0.545%,1.248%,2.798%;重现性试验的RSD为1.105%,1.446%,5.284%;回收率分别为99.5%,67.6%,47.4%。该方法操作简单,试剂用量小,耗时短,结果准确可靠,可用于液态乳中胆固醇的准确测定。此外,本试验应用该方法测定了13种液态乳,发现除了母乳样品中含有少量的7-脱氢胆固醇和25-羟基胆固醇外,其它奶制品中均未检测出。