为探讨乳糖酶凝胶微球的制备工艺及过胃保护作用，以海藻酸钠和κ-卡拉胶作为载体包埋乳糖酶，以氯化钙和ε-聚赖氨酸为硬化剂，分别用κ-卡拉胶和ε-聚赖氨酸为涂覆材料，采用离子交联法和复凝聚法相结合制备载乳糖酶凝胶微球。在单因素试验基础上，以乳糖酶存活率为响应值，采用Box-Behnken中心组合设计和响应面法优化乳糖酶凝胶微球的最佳制备工艺。结果表明：ε-聚赖氨酸质量分数对乳糖酶存活率的影响最大，其次是κ-卡拉胶涂液质量分数，再次是复配胶（m海藻酸钠 ∶ m卡拉胶=8 ∶ 2）总质量分数的影响。优化的制备工艺参数为：复配胶总质量分数2.8%、ε-聚赖氨酸质量分数0.6%、κ-卡拉胶涂液质量分数1.5%，在此条件下乳糖酶存活率达85.48%。凝胶微球在模拟的饭后胃环境中乳糖酶存活率在85%以上，说明乳糖酶凝胶微球具有作为功能性食品的潜力，可应用于乳糖酶不耐受人群。