目的:基于鲨鱼皮明胶水解肽的抗氧化活性,制备、分离纯化高活性的抗氧化多肽。方法:分别使用5种商业蛋白酶水解鲨鱼皮明胶,测定其水解产物的DPPH自由基清除能力、ABTS自由基清除活性以及对Fe2+诱导卵黄脂蛋白多不饱和脂肪酸过氧化反应的抑制作用;利用SP-Sephadex C-25阳离子交换色谱、Sephadex G-50凝胶过滤色谱和C18反向高效液相色谱(HPLC)对酸性蛋白酶的水解产物进行分离纯化。结果:酸性蛋白酶水解产物具有最佳的抗氧化活性;利用SP-Sephadex C-25、Sephadex G-50和C18-HPLC对酸性蛋白酶的水解产物进行分离纯化,所得洗脱组分E2具有最强的清除DPPH自由基活性。经过ESI质谱分析,其多肽组分的主要分子质量为1356u。结论:本研究制备并分离纯化得到高活性的抗氧化多肽,为将来的生产应用提供理论依据。