建立了同时检测水产品中四环素母体及其差向异构体四环素、土霉素、金霉素、强力霉素、4-差向四环素、4-差向土霉素、4-差向金霉素共7种药物的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）方法。样品采用0.1 mol/L Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取2次，经滤纸过滤和高速离心除去提取液中大颗粒物质，取提取液的一半体积上HLB固相萃取柱净化，应用Waters Acquity UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）高效分离，以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相梯度洗脱，电喷雾正离子多反应监测模式监测，质谱分段扫描方式扫描。结果表明，7种四环素药物呈现良好的线性关系（R2>0.995），4种四环素母体的定量限（S/N=10）为2.0 μg/kg，3种代谢物的定量限为5.0 μg/kg。各分析物的加标回收率为70.3%~90.5%，RSD为5.5%~11%。本方法分析时间短，8 min内即完成7种药物的分离，且分离效果好，峰形尖锐。方法的灵敏度、准确度高，适用于水产品中四环素类母体和代谢物的同时测定。