• 2015年第11期文章目次
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    • 母婴肠道微生态与健康

      2015(11):1-6.

      摘要 (7) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:母婴作为一类特殊人群,其特定的肠道微生态可伴随子代的生长发育逐渐发生演变。肠道菌群既能调节宿主各项生理功能,也能影响疾病的发生、发展。正常肠道微生态的建立对母婴的营养、代谢和免疫发育至关重要。本文综述了母婴肠道菌群、免疫系统、肠道微生态与疾病的发生、发展关联性等方面的研究进展情况。

    • >研究报告
    • BALB/c小鼠动物模型评价食物过敏性的可行性研究

      2015(11):7-15.

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      摘要:目的:动物模型对于模拟人体食物过敏的可能性以及用来评价食品致敏性的可行性一直存在争议。本研究中使用BALB/c小鼠研究了其作为食物过敏动物模型的可行性,并对几种食物中蛋白的致敏性进行评价。方法:选择大豆球蛋白、卵清白蛋白、马铃薯碱性磷酸酶作为受试物,对各蛋白进行BALB/c小鼠模型研究,模拟胃液消化试验和生物信息学分析。取3~4周龄雌性BALB/c小鼠,经口给予蛋白诱发致敏。大刺激后,测定动物血浆中组胺水平,血清中特异性Ig E、Ig G1水平,m MCP-1水平和肠道渗透性,并对主要脏器进行病理组织学观察。结果:给予BALB/c小鼠一次经口致敏各蛋白,各组间特异性抗体Ig E、Ig G1水平、m MCP-1水平、组胺水平以及白蛋白水平均未表现出明显差异;而给BALB/c小鼠多次接触过敏原时,特异性抗体Ig E、Ig G1水平、组胺以及白蛋白水平都有显著性升高,产生明显的Th2型免疫反应,且BALB/c小鼠能区分这些蛋白的致敏性,即大豆球蛋白>卵清白蛋白>马铃薯碱性磷酸酶。模拟胃液消化试验也验证了动物试验对受试蛋白致敏性的分析结果。通过生物信息学对抗原指数分析,同样发现大豆球蛋白致敏性显著高于卵清白蛋白和马铃薯碱性磷酸酶。结论:BALB/c小鼠用于研究食品过敏原中的大豆球蛋白、卵清白蛋白、马铃薯碱性磷酸酶的致敏性是可行的,能够区分这些食物蛋白的致敏性。

    • 鲫鱼卵唾液酸糖肽对成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化、矿化及OPG/RANKL基因表达的影响

      2015(11):16-22.

      摘要 (4) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的:研究鲫鱼卵唾液酸糖肽(Ca-SGPP)对成骨细胞MC3T3-E1骨形成活性及OPG/RANKL基因表达水平的影响。方法:在MC3T3-E1细胞中加入不同浓度的Ca-SGPP,采用MTT法、试剂盒和茜素红染色法检测Ca-SGPP对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响;利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测MC3T3-E1细胞骨形态发生蛋白-2(BMP-2)、骨保护素(OPG)及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)基因m RNA表达水平。结果:Ca-SGPP可显著促进MC3T3-E1细胞增殖及ALP、OCN和COL I的分泌,提高MC3T3-E1细胞矿化能力,上调其BMP-2表达水平及OPG/RANKL的比值,且分子质量大的糖肽效果更佳。结论 :CaSGPP具有促进MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的能力,其机制可能与OPG/RANKL比值上调有关。

    • 德式乳杆菌保加利亚亚种thyA基因缺陷型菌株的构建

      2015(11):23-28.

      摘要 (11) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的:获得由插入序列ISS1构建的德式乳杆菌保加利亚亚种胸腺嘧啶合成酶thy A基因缺陷型菌株。方法:利用两端带有ISS1的载体p Ghost9:ISS1,经复制型转座构建突变体,以50μg/m L脱氧胸苷、梯度浓度三甲氧苄胺嘧啶(TMP)连续富集传代培养,以添加终质量浓度50μg/m L脱氧胸苷的SA平板以及未添加脱氧胸苷的SA平板筛选thy A基因缺陷型菌株。结果:获得生物学性状稳定,回复突变率低的thy A基因插入突变株。

    • 树干毕赤酵母木糖醇脱氢酶基因表达载体构建及在酿酒酵母中的过表达

      2015(11):29-33.

      摘要 (17) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:针对树干毕赤酵母xyl2基因设计相应引物。以p-AKRX为骨架载体,通过酶切连接的方式构建1个酿酒酵母工业菌株的表达载体p-AKRX2-2。将该表达载体线性转化酿酒酵母后,测定转化子SUN-Ⅰ木糖醇脱氢酶(XDH)及其表达情况。与原始菌株相比,重组酿酒酵母中的XDH活力是原始菌株的3.65倍。该重组质粒载体的构建可有效弥补酿酒酵母缺少代谢木糖关键基因的缺陷,为利用木糖高产乙醇酿酒酵母基因工程菌株的构建奠定基础。

    • 重组大肠杆菌内PDC和ADH表达条件优化

      2015(11):34-40.

      摘要 (4) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:丙酮酸脱羧酶和乙醇脱氢酶II可将丙酮酸定向转化成乙醇。将已构建的含有丙酮酸脱羧酶和乙醇脱氢酶II基因的表达载体p ET-28a(+)-pdc-RBS-adh B转入大肠杆菌BL21中,实现在大肠杆菌体内高产乙醇的目的。对该工程菌株进行定性检测,优化诱导表达条件,定量检测,SDS-PAGE分析和做发酵试验,结果表明丙酮酸脱羧酶和乙醇脱氢酶II的最佳表达条件为IPTG浓度1.0 mmol/L,诱导时间7 h,诱导温度37℃。其最大酶活分别为1.34 U/mg和3.88 U/mg。重组子利用葡萄糖、木糖和混合糖发酵。在葡萄糖中发酵72 h,获得最大乙醇产量6.86 g/L,最高乙醇得率0.40 g/g。

    • 大豆蛋白-磷脂酶解物共建乳化体系性质研究

      2015(11):41-47.

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      摘要:通过对大豆分离蛋白-磷脂酶解产物乳状体系的共建,探究不同磷脂酶A1,A2,C,D酶解磷脂对乳化体系乳化性质的影响,测定添加不同磷脂酶解产物后蛋白乳化体系的可溶性蛋白含量、乳化活性、乳化稳定性、乳层析指数、Zeta电位、粒径分布、光学显微镜的变化。结果表明,磷脂酶解产物与大豆分离蛋白有明显的交互作用,其中磷脂经磷脂酶A2酶解后的产物与大豆分离蛋白共建的乳化体系,在乳化活性、稳定性、粒径分布、Zeta电位、显微结构方面均好于其它复合体系。其乳化活性提高10.17 m2/g,稳定性提高25.2%,负Zeta电位绝对值增加5.09 m V,乳状液平均粒径明显变小,显微结构乳滴分布均匀。这表明经磷脂酶A2酶解后的磷脂非极性基团减少,亲水性增强,与蛋白交互作用增强,使蛋白更好的结合到磷脂的片层结构中,改变复合物结构,促进乳化体系稳定。

    • 异常维克汉姆酵母的乙酸苯乙酯合成途径

      2015(11):48-53.

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      摘要:以福建红曲黄酒酿造用曲中分离得到的异常维克汉姆酵母为试验菌株,采用发酵过程跟踪法和诱变法相结合,研究该酵母菌的乙酸苯乙酯合成途径。结果表明:该菌在发酵过程中同时存在醇酰基转移酶合成途径和酯酶合成途径,发酵过程跟踪法显示底物乙酸与乙酸苯乙酯的相关性大,说明酯酶合成途径是合成乙酸苯乙酯的主要途径。通过诱变法得到发酵力相同、醇酰基转移酶酶活不变、酯酶合成酶活力和水解酶活力下降的异常维克汉姆酵母突变菌株。该突变菌株发酵结果显示产乙酸苯乙酯水平显著下降,表明酯酶合成途径是合成乙酸苯乙酯的主要途径。通过确定异常维克汉姆酵母对黄酒风味有显著影响的乙酸苯乙酯合成途径,为以分子生物学技术为手段改良和优化酿酒酵母提供酶学基础,也为定向改进黄酒风味和滋味提供科学导向。

    • >应用技术
    • 高速连续和面机的和面效果及其对面条质量的影响

      2015(11):54-61.

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      摘要:为了明确不同输料方式和搅拌速度的高速连续和面机的和面效果及其与间歇式和面机的差异,以3种小麦粉(高筋一等粉、富强粉、上白粉)为原料,采用2种高速连续和面机和1种双轴卧式和面机和面,分析和面效果及面条质量。试验结果表明,3种和面方式的和面效果存在较大差异,对面条质量影响显著。与2种高速连续和面机相比,采用双轴卧式和面机,面絮胚粒粒径较小,鲜面条拉伸特性较好,干面条烹调损失和吸水率较低,熟面条质地紧实、咀嚼性好,然而复合后的面片色泽偏暗。2种高速连续和面机的输料方式和搅拌速度不同,其制品质量差异显著。采用和面方式Ⅲ(水平输料、搅拌速度1 440 r/min),3种小麦粉面絮的中等粒径胚粒比例均显著小于和面方式Ⅱ(纵向输料、搅拌速度970 r/min),上白粉面絮的大颗粒(粒径≥4 000μm)胚粒比例显著较高,高筋一等粉面絮的水分均匀性和富强粉面片的色泽b*值均匀性较差。然而,其面片色泽较好,白且光亮,鲜面条拉伸特性也优于和面方式Ⅱ。2种连续和面机制作的面条质构也存在显著差异,然而对于不同品质的面粉,其差异表现不同。高筋一等粉和富强粉的蛋白质和湿面筋含量较低、颗粒较大,采用和面方式Ⅱ,其干面条烹调损失显著小于和面方式Ⅲ,其熟面条硬度、胶着性、咀嚼性显著较高;而对于蛋白质和湿面筋含量较高,颗粒小的上白粉,采用和面方式Ⅲ,其干面条烹调吸水率较低,熟面条质地更紧实。

    • 产脂肪酶海洋微生物的筛选、鉴定及酶学性质研究

      2015(11):62-70.

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      摘要:目的:从海洋来源样品中筛选脂肪酶产生菌,并对其进行鉴定和酶学性质研究。方法:以橄榄油为唯一碳源,采用固体平板变色圈观察法筛选脂肪酶产生菌。利用16S r DNA序列分析对其进行鉴定,并对脂肪酶酶学性质进行研究。结果:从海鳗和鲍鱼肠道内容物以及平潭海域、北极和盐湖泥样5个样品中共分离筛选出22株脂肪酶产生菌,其中ZF-16菌株产酶能力较强,根据其形态特征及16S r DNA序列分析鉴定为洋葱伯克霍尔德菌。其酶学性质研究表明,该脂肪酶最适反应p H为9.0,在p H 5.0~10.0范围稳定;最适反应温度75℃,当温度小于40℃时较稳定;低浓度(1 mmol/L)的Na+和K+对脂肪酶的活性有激活作用,Zn2+对脂肪酶有强烈的抑制作用;对C4C18均有降解作用,尤其对中长链的三辛酸甘油酯(C8)具有较强的降解能力。结论:从海洋来源的样品中筛选到产脂肪酶能力较强的细菌ZF-16菌株,经鉴定为洋葱伯克霍尔德菌。其所产脂肪酶为碱性高温脂肪酶,对C4C18底物有降解作用,可用于食品烘焙、废纸脱墨和造纸脱胶工业。

    • 短蛸产蛋白酶菌的鉴定、发酵条件优化及酶学性质

      2015(11):71-77.

      摘要 (6) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:采用生理生化特征、16S r DNA分析的方法对分离自短蛸胃肠道产蛋白酶菌株S-3进行鉴定。通过单因素试验、正交设计优化发酵产生蛋白酶条件,对产蛋白酶的粗酶性质进行研究。结果表明,菌株S-3与灿烂弧菌最相似,在以淀粉0.5%,蛋白胨0.5%,酵母膏0.1%,磷酸高铁0.1%为最佳培养基,初始p H 8.0,接种量7%,20℃发酵3.5 d时产蛋白酶活性最高,即121.1 U/m L。所产粗蛋白酶最适作用p H 9.0,最佳作用温度50℃,具有较高的热稳定性及p H稳定性,这为蛋白酶的工业应用提供了理论依据。

    • 发酵山药酸奶益生乳酸菌菌株的筛选

      2015(11):78-82.

      摘要 (9) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:以从天然发酵食品、微生态制剂及保健品中自行分离选育的11株益生乳酸菌为试验菌株,进行山药乳发酵。通过对发酵前、后p H值、活菌数、理化特性等指标的分析,综合感官品评结果,层层筛选,得到繁殖能力强,发酵活力高和口感风味佳,适宜发酵山药酸奶的2株益生乳酸菌。试验结果表明:干酪乳杆菌05-20和植物乳杆菌FS-4作为发酵山药酸奶的备选菌株,其达到发酵终点(p H=4.5)时活菌数分别为3.63×108cfu/m L和6.61×108cfu/m L,滴定酸度分别为60.85和64.59,脱水收缩敏感性分别为31.42和32.96,为进一步开发山药酸奶产品提供理论依据。

    • 海洋来源芽孢杆菌产木聚糖酶的条件研究

      2015(11):83-90.

      摘要 (12) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:木聚糖酶来源广泛,目前发现的产酶菌株大部分来源于陆地,而对海洋微生物的研究较少。从福建平潭海域筛选到1株产木聚糖酶活力较高的B659菌株,经16Sr DNA鉴定为同温层芽胞杆菌。对B659菌株进行产酶培养基及发酵条件的优化。优化的产酶液体培养基是:麸皮6%,豆饼粉1%,K2HPO410 mmol/L,初始p H 6.0。经培养基优化的木聚糖酶活力提高了1.6倍。优化的发酵条件是:温度30℃,摇床转速230 r/min,装液量25 m L/250 m L,接种量8%(体积分数)。酶活力较优化前提高了0.7倍。经产酶培养基及发酵条件的优化,木聚糖酶活力达到2 838 U/m L,提高了3.4倍,发酵周期由72 h缩短至30 h。

    • 芦荟多糖的超声波辅助纤维素酶提取及抗肿瘤活性研究

      2015(11):91-97.

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      摘要:用超声波辅助纤维素酶法提取芦荟多糖,并测定其抗肿瘤活性。采用响应面法优化超声波辅助纤维素酶提取芦荟多糖的条件。通过测定芦荟多糖对人体肝癌细胞HepG2生长的影响,研究其抗肿瘤活性。结果显示,当料液比1/30(g/mL)、超声波功率600W、pH5.0时,最佳提取条件为加酶量0.2%、提取温度49℃、提取时间16min。此条件下芦荟多糖的提取率为5.99%,比超声波辅助法和纤维素酶法分别提高了9.91%和37.38%。芦荟多糖具有较好的抗肿瘤活性,随着浓度的增加,其对HepG2细胞的生长抑制率逐渐增强。当其质量浓度为160mg/mL时,使70%的HepG2细胞处于裂解状态。超声波辅助纤维素酶法是一种新的、有效的芦荟多糖提取方法。

    • 辛烯基琥珀酸芋艿淀粉酯制备及性质研究

      2015(11):98-104.

      摘要 (6) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:以芋艿淀粉为原料,采用湿法制备辛烯基琥珀酸芋艿淀粉酯。以辛烯基琥珀酸淀粉酯取代度(DS)为指标,研究芋艿淀粉浓度、辛烯基琥珀酸酐用量、反应温度、反应时间对辛烯基琥珀酸芋艿淀粉酯制备的影响。在单因素试验的基础上,通过正交试验优化辛烯基琥珀酸淀粉酯制备工艺。结果表明:辛烯基琥珀酸芋艿淀粉酯制备的适宜工艺条件:淀粉质量分数40%、辛烯基琥珀酸酐用量为2.0%芋艿淀粉干重、反应温度40℃、反应时间3 h。在该工艺条件下,制得的辛烯基琥珀酸芋艿淀粉酯颗粒结构发生变化,糊化温度由原淀粉的最高温度85.49℃变为82.15℃,红外光谱图中1 710~1 740 cm-1,1 550~1 610 cm-1区间分别出现酯羰基(C=O)伸缩振动吸收和RCOO-特征吸收,可断定辛烯基琥珀酸与淀粉酯化生成辛烯基琥珀酸淀粉酯。

    • 响应面法优化提取三叶青叶中总黄酮的两种工艺比较

      2015(11):105-112.

      摘要 (3) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:以总黄酮得率为评价指标,用响应面分析法优化冷凝回流法和超声法提取的三叶青叶中总黄酮的工艺。通过单因素试验获得各因素对总黄酮得率的较佳范围,然后采用响应面法对工艺参数进行优化。冷凝回流法的最佳工艺条件是:乙醇体积分数68%,提取温度69℃,提取时间100 min/次,提取2次,料液比1:25 g/m L。在此条件下三叶青叶中总黄酮得率4.42%。超声法提取的最佳工艺条件是:乙醇体积分数61%,提取温度59℃,提取时间25 min/次,提取2次,超声功率190 W,料液比1∶25 g/m L。此条件下总黄酮得率5.29%。从提取工艺来看,超声法的设备更简单,提取温度较低,可避免热能损耗和活性成分的破坏,同时效率高,黄酮得率较高。超声法是提取三叶青叶中总黄酮的较好的办法。

    • 卡拉胶-仙草胶复合膜制备工艺优化

      2015(11):113-120.

      摘要 (10) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:以卡拉胶、脱色仙草胶为基质,在不同单因素对复合膜性能的影响试验基础上,选取总固形物、配比、蔗糖酯以及干燥温度为参试因子,以穿刺强度、拉伸强度、断裂伸长率、水蒸气透过系数为指标,做均匀正交试验;采用主成分几何平均分析法进行多指标综合分析。结果表明,在总固形物1.6%,仙草胶/卡拉胶质量比20/80,蔗糖酯0.1%,干燥温度52℃的条件下,控制甘油含量1.5%,p H 7,可以获得综合性能优良的卡拉胶-仙草胶复合膜。

    • 脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素污染小麦重力分选改进技术

      2015(11):121-127.

      摘要 (10) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了消除小麦中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)毒素进入食物链对人和动物食物安全造成的隐患,根据DON毒素污染的小麦籽粒与正常麦粒比重的差异,基于重力分选技术的基础原理,提出在筛面出料边设置出料装置的分选改进技术。以DON毒素不同污染程度的小麦设计出料装置,并对DON毒素污染籽粒分选效果作评价。结果表明,出料装置的重力分选改进技术使筛面小麦分布理想,尤其使DON毒素污染籽粒高度集中在筛面污染籽粒出料口附近。与常规的重力分选技术相比,采用改进技术分选后所得毒素污染籽粒部分占总分选小麦的数量减少,且毒素质量分数提高,用于后续加工的正常麦粒的获选率提高。重力分选改进技术可实现小麦中DON毒素污染籽粒的高效分选。

    • 微酸性电解水去除赭曲霉毒素A的研究

      2015(11):128-134.

      摘要 (12) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:谷物、谷类制品以及植物性食品在贮藏不当时易霉变产生赭曲霉毒素A(OTA)。在不同条件下将微酸性电解水加入OTA溶液中,采用HPLC法检测OTA的含量。结果表明,酸性电解水对OTA有较好的去除作用,且微酸性电解水的去除效果更佳。进一步研究表明,微酸性电解水在p H5.13时去除效果最好,去除率达到96.23%。随着微酸水有效氯浓度(ACC)值的增加,OTA的去除率逐渐增加,当ACC为41.75 mg/L时去除率达到96.4%。去除OTA的机理可能与微酸性电解水中的HCl O有关,OTA与HCl O分子发生取代,使得原有结构发生变化。此外,OTA的去除效果还随着料液比的减少及处理时间的增加而呈现增加趋势。在室温(25℃)条件下选用料液比1∶1、ACC值为40 mg/L的微酸性电解水处理5 min,即可去除OTA 90%以上。

    • 青花椒干燥过程叶绿素光降解原因初探

      2015(11):135-141.

      摘要 (11) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了探究青花椒干燥过程中变色的机理,以鲜青花椒为研究对象,采用黄、蓝、紫外光3种单色光及日光(复合光)照射鲜青花椒至干燥。以遮光干燥为对照,研究干燥过程中青花椒中还原型谷胱甘肽(GSH)、抗坏血酸(ASA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、超氧自由基(O2-)、过氧化氢(H2O2)、丙二醛(MDA)等与活性氧有关的指标的变化以及叶绿体膜脂肪酸组成和含量的变化。结果表明:紫外光是造成青花椒干燥过程中叶绿素降解的主要单色光。在光照射下,青花椒体内活性氧的产生,活性氧清除系统能力的降低及叶绿体膜脂的脂肪酸比例改变,使活性氧中的小分子更容易进入叶绿体中,从而加速叶绿素的降解。

    • 葡萄籽多酚抑制血管紧张素转化酶活性的研究

      2015(11):142-147.

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      摘要:为了研究葡萄籽多酚对血管紧张素转化酶(ACE)活性的影响,选取赤霞珠、霞多丽和山葡萄3种葡萄籽,通过丙酮法回流提取葡萄籽总酚,采用调节p H结合溶剂萃取法分离得到中性酚和酸性酚。采用高效液相色谱法测定马尿酸生成量,以此评价总酚、中性酚和酸性酚抑制ACE的活性。将具有较高抑制活性的中性酚经C18固相萃取小柱分离得到3种组分(F1,F2,F3),高效液相色谱-质谱联用鉴定各组分的成分并比较抑酶能力。结果表明,葡萄籽的不同类型的多酚对ACE活性均有抑制作用,其抑制效果不同:中性酚的抑酶效果显著优于酸性酚,且与总酚相似。液质谱检测结果表明,F1为儿茶素、表儿茶素没食子酸酯和异槲皮苷;F2为原花青素B1;F3为大分子质量聚合物。其中,F2的抑酶效果显著强于F1和F3。

    • >食品安全与检测
    • 上海市食源性金黄色葡萄球菌环丙沙星耐药性的形成与gyrA,grlA基因突变的相关性

      2015(11):148-153.

      摘要 (8) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的:探讨食源性金黄色葡萄球环丙沙星耐药性的形成与gyr A和grl A基因突变的关系。方法:采用纸片扩散法和E-test法测定来源于上海市的135株食源性金黄色葡萄球菌对环丙沙星的药物敏感性和最低抑菌浓度(MIC),采用PCR技术扩增gyr A和grl A基因并测序。运用同源比对方法分析敏感菌株和耐药菌株在这两个基因序列上的差异性。结果:135株食源性金黄色葡萄球菌对环丙沙星的耐药率达36.30%,gyr A和grl A的携带率均为93.33%,gyr A和grl A的突变率分别为37.30%和53.97%。结论:食源性金黄色葡萄球菌对环丙沙星的耐药性的形成与gyr A和grl A的突变密切相关,环丙沙星等喹诺酮类药物作用于金黄色葡萄球菌的首要靶位点是拓扑异构酶IV。如果仅grl A发生突变,则导致该菌株低水平耐药性的形成;如果gyr A和grl A同时发生突变,就导致金黄色葡萄球菌高水平耐药性的形成。

    • 冷冻胁迫对金黄色葡萄球菌亚致死及clfA,msrR毒力基因转录的影响

      2015(11):154-159.

      摘要 (10) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:通过测定-18℃冻藏条件下金黄色葡萄球菌亚致死及生理指标的变化规律,探究其冷冻亚致死及耐受机制。通过实时定量荧光PCR研究冷冻胁迫对亚致死金黄色葡萄球菌毒力基因clf A和msr R转录的影响。结果表明:-18℃下冷冻0~90 d,金黄色葡萄球菌活性细胞数目减少,亚致死率上升,电导率、蛋白泄漏量、细胞破损率和总糖含量均升高。冷冻90~180 d时,活细胞数目不再下降,电导率和蛋白泄漏量趋于平缓,总糖含量下降。实时定量荧光PCR结果显示亚致死金黄色葡萄球菌clf A msr R基因转录表达上调。本试验结果表明,在冷冻初期正常金黄色葡萄球菌因低温环境造成的细胞结构损伤而致死。90 d后存活的亚致死细胞可抵御冷冻胁迫,维持细胞形态及代谢,然而仍具有感染致病能力和耐药性。

    • 铜绿假单胞菌重要外毒素基因多重PCR检测方法的建立

      2015(11):160-164.

      摘要 (9) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:铜绿假单胞菌是一种重要的机会致病菌,Ⅲ型分泌系统、绿脓菌素、弹性蛋白酶和外毒素A是其重要的致病因子。不同铜绿假单胞菌株呈现出高度的基因多样化,导致一些菌株缺乏部分毒素基因。为判断铜绿假单胞菌株毒性,建立了一种多重PCR的检测方法,检测其内标基因ecf X和5种重要的外毒素基因(tox A,phz M,las B,exo U和exo S)。结果引物特异性良好,通过引物浓度优化,多重PCR反应中最低检出限达5 pg。通过此方法成功筛查到不同铜绿假单胞菌株中毒素基因缺失情况。其中,菌株PAO1、PAK、PKE 117和ACCC 10647缺失exo U,菌株PA103和PA14缺失exo S,菌株PAK缺失las B。这种快速、简便的多重PCR方法可在今后常规监察或疾病暴发时检测铜绿假单胞菌株毒素基因,以此判断其毒力和致病性。

    • 量子点标记结合电化学免疫检测黄曲霉毒素B1

      2015(11):165-169.

      摘要 (4) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:将量子点标记技术与电化学检测技术相结合,基于竞争免疫分析,成功构建黄曲霉毒素B1(AFB1)检测新方法。以水相合成Pb S量子点,通过TEM成像、XRD对其进行表征。随后以量子点标记AFB1单克隆抗体作为信号探针,基于酶标板表面AFB1人工抗原和样品中AFB1与量子点标记的AFB1单克隆抗体之间的竞争免疫结合,建立AFB1新型检测方法。在优化的条件下,方法线性范围0.1~30 ng/m L,检测限0.03 ng/m L。花生样品中加标回收试验结果表明,方法准确性良好,可用于实际样品的检测,为其它真菌毒素的检测提供参考。

    • 3种真菌毒素(ZEN、DON及T2)完全抗原的合成与鉴定

      2015(11):170-177.

      摘要 (9) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的:合成玉米赤霉烯酮(ZEN)、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)和T2 3种真菌毒素的完全抗原。方法:将ZEN半抗原、DON及T2与阳离子化的载体蛋白(BSA和OVA)偶联,制备高特异性的完全抗原。用高性能基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱仪(MALDI-TOF)检测偶联物及载体蛋白的分子质量,用商品化的ZEN、DON和T2单克隆抗体对偶联物进行免疫滴定验证。结果:平均每个BSA偶联上的ZEN、DON和T2的分子个数分别为20.81,6.03,4.92个,平均每个OVA偶联上的ZEN、DON和T2分子个数分别为7.17,3.05,2.80个,偶联物与ZEN、DON及T2的抗体呈阳性反应。结论:合成的ZEN、DON及T2完全抗原为3种毒素抗体的制备及免疫学方法的建立奠定了基础。

    • 己烯雌酚及代谢物在鲫鱼体内的组织分布及药物代谢动力学

      2015(11):178-185.

      摘要 (10) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:为全面了解己烯雌酚在鲫鱼体内的残留、消除和药物动力学特征,采用超高效液相色谱-串联质谱法,研究口服灌药给药时己烯雌酚及其主要代谢物双烯雌酚在鲫鱼体内的组织分布和药物代谢动力学。在水温(12±2)℃条件下,鲫鱼口服灌药0.1,1.0 mg/(kg bw)和10.0 mg/(kg bw)后,其血浆、肌肉和肝脏中己烯雌酚浓度-时间曲线关系符合一级吸收的二室开放动力学模型。以剂量1.0 mg/(kg bw)为例,3种组织中己烯雌酚峰值水平肝脏最高,肌肉次之,血浆最低,己烯雌酚的平均消除速率均较快,分别为26.7μg/(L·h),3.75μg/(kg·h)和9.26μg/(kg·h),在12,144 h和144 h各降至检出限以下。己烯雌酚代谢物———双烯雌酚在鲫鱼的血浆、肌肉和肝脏中药物水平的变化趋势与己烯雌酚基本相似,均表现先升高后降低的趋势。双烯雌酚分别在血浆、肌肉和肝脏中3,10 h和8 h达到最大浓度值,12,144 h和144 h降至检出限以下。采用DAS2.0药物代谢动力学参数计算程序,处理口服灌药后鲫鱼体内的己烯雌酚浓度-时间数据,计算有关药物代谢动力学参数。以1.0 mg/(kg bw)己烯雌酚为例,结果发现:血浆、肌肉、肝脏的AUC相差较大,说明不同组织对己烯雌酚的蓄积能力有差别;血浆、肌肉和肝脏的CL/F值依次为1.041,0.121 L/(h·kg)和0.052 L/(h·kg),说明己烯雌酚在鲫鱼体内分布广,消除较快。本试验中,在己烯雌酚0.1,1.0 mg/(kg bw)和10.0 mg/(kg bw)口服灌药浓度下,建议其消除期分别定为4,6 d和7 d。水温高时可适当缩短消除期,水温低时可适当延长消除期。本研究的药时曲线可为鲫鱼己烯雌酚的消除净化提供基础数据。

    • 即食海参优势腐败菌群体感应信号分子识别

      2015(11):186-191.

      摘要 (5) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了研究即食海参革兰氏阴性腐败菌是否具有以群体感应介导的腐败特性,以根癌农杆菌CF11为指示菌,检测即食海参优势腐败菌H-3产生AHLs信号分子,结果 H-3在菌体生长至20 h时的AHLs活性最高。质谱分析发现H-3产生N-己酰基-高丝氨酸内酯(C6-HSL)。添加适量外源信号分子能促进菌株H-3生物膜的形成,降解H-3的AHLs后可阻断其蛋白酶的产生。经16S r DNA鉴定该菌为即食海参优势腐败菌。结论:即食海参优势腐败菌存在以AHLs介导的群体感应系统,与即食海参的腐败密切相关。

    • 高效液相色谱-串联质谱法测定草莓中的4-氯苯氧乙酸和2,4-二氯苯氧乙酸

      2015(11):192-198.

      摘要 (2) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:建立了草莓中4-氯苯氧乙酸和2,4-二氯苯氧乙酸的高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品前处理采用Qu ECh ERS方法,以乙腈振荡提取,加入无水Mg SO4、Na Cl、二水合柠檬酸钠和柠檬酸氢二钠(1.5水),促进乙腈与水液液分离。提取液以对丙基苯磺酸基吸附剂(SCX)吸附花色苷,结合C18填料和无水Mg SO4分散固相萃取净化。采用C18色谱柱分离,甲醇和0.1%甲酸水溶液洗脱,多反应监测负离子模式扫描分析。两个目标物在0.025~1.0 mg/L范围内,线性关系良好,R2>0.999,检出限(LOD,S/N=3)为0.005 mg/kg,方法的定量下限(LOQ,S/N=10)为0.015 mg/kg,加标回收率为85.3%95.4%,日内精密度为1.1%6.9%,日间精密度为2.0%8.7%。该方法稳定、可靠,可满足草莓中两个目标物的检测要求。

    • 疏穗处理对“赤霞珠”葡萄及葡萄酒中生物胺含量的影响

      2015(11):199-205.

      摘要 (4) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:生物胺对葡萄酒品质及安全性有不良作用,其含量由葡萄果实及酿造过程决定,其中疏穗处理等栽培措施对果实中生物胺含量及种类有重要影响。本试验分析3种疏穗方式对葡萄果实及葡萄酒中生物胺含量的影响,监控葡萄酒发酵过程中生物胺含量的变化,结果发现1.0穗/新梢疏穗处理的葡萄果实品质良好,所得葡萄酒中生物胺含量少,适合葡萄生长及后续酿酒。同时发酵可减弱疏穗处理对葡萄酒中生物胺含量的影响。此外,监控发酵过程也十分重要。

    • 麻竹笋腌制过程中细菌群落动态变化分析

      2015(11):206-211.

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      摘要:为了解麻竹笋腌制发酵过程中细菌群落的微生态演变情况,采用细菌16S r DNA的V3可变区的PCRDGGE技术监测6%Na Cl腌制麻竹笋的细菌群落组成和优势菌群的动态变化。经发酵液中细菌基因组DNA提取、巢式PCR、二次DGGE、切胶回收、测序及序列比对,共得到10条明显条带,分别鉴定为绿色气球菌、乳球菌属、食窦魏斯氏菌、魏斯氏菌属、噬甲基菌属、嗜盐嗜碱菌属、未培养细菌、乳球菌属、乳酸乳球菌、厌氧芽孢杆菌属和芽孢杆菌属。其中,发酵前3 d优势菌为绿色气球菌,7 d后优势菌为食窦魏斯氏菌和乳酸乳球菌。

    • 乳清蛋白钙螯合肽的分离及结构性质表征

      2015(11):212-218.

      摘要 (6) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:目的:酶解乳清蛋白,通过连续色谱手段分离出强钙螯合活性的肽,再通过结构表征研究其钙螯合性质。方法:酶法水解制备乳清蛋白多肽,采用DEAE-650M阴离子交换色谱、Sephadex G-25凝胶过滤色谱、C18反向高效液相色谱(RP-HPLC)分离乳清蛋白酶解产物,得到特异性的钙螯合肽。采用核磁共振、X射线衍射、TGDSC、Zeta电位结构表征分析钙螯合性质。结果:乳清蛋白多肽经分离纯化得到具有强钙螯合力的肽,命名为WPH-13。其钙螯合活性为63.49μg/mg,结构鉴定发现钙离子可能被一个或多个WPH-13包裹在中央,主要结合位点是羰基氧和氨基氮。与钙结合后p H稳定性和热稳定性提高,抗氧化活性加强。结论:从乳清蛋白中分离得到的钙螯合肽具有较高的钙螯合活性。通过结构性质鉴定研究螯合物的作用机理,为第3代补钙剂的生产应用奠定基础。

    • pH偏移结合加热处理对大豆分离蛋白结构特性的影响

      2015(11):219-226.

      摘要 (8) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:探讨了p H偏移结合加热处理对大豆分离蛋白结构特性的影响。将大豆分离蛋白经酸性条件(p H 1.5)结合加热(50和60℃)处理0,1,3,5 h,然后恢复到中性条件,测定处理前、后大豆分离蛋白的总巯基和活性巯基以及紫外二阶光谱、色氨酸内源荧光光谱和蛋白电泳的变化。研究结果表明,p H 1.5偏移结合加热处理条件,大豆分离蛋白的总巯基和活性巯基含量显著下降(P<0.05),其随时间的变化不显著(P>0.05)。紫外扫描和色氨酸荧光分析表明大豆分离蛋白的二级和三级结构发生改变,暴露出更多的疏水基团。SDS-PAGE电泳表明,大豆分离蛋白产生了非二硫键的共价聚集。p H偏移结合加热处理在一定程度上改变了大豆分离蛋白的结构特性。

    • 热烫对超高压杀菌泡菜风味成分的影响

      2015(11):227-233.

      摘要 (8) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:为了探讨热烫护色对超高压杀菌泡菜风味的影响,将发酵成熟的泡菜置于沸腾泡菜水中热烫1.5 min,真空包装后于550 MPa超高压处理5 min,采用SPME-GC-MS测定泡菜香气成分的变化。结果表明,热烫处理对超高压泡菜的风味成分产生显著影响,与未热烫处理的成熟泡菜及高压杀菌泡菜相比,醇类分别增加43.3%及10.4%;酸类分别减少87.4%及69.1%;酯类分别减少75.9%及53.3%,而异硫氰酸酯类分别增加36.8%及8.3%;硫醚类及二硫化物分别减少43.9%及29.9%。从风味上看,热烫护色处理使超高压泡菜中具有清新风味的芳樟醇、α-松油醇、香茅醇、萜品烯、柠檬醛以及异硫氰酸酯类增加,而具有刺激、异香及脂香气的酸类、α-水芹烯、莰烯、二硫化物、某些烯烃类及其它挥发性化合物减少。总之,热烫使泡菜脂香及异味减少,清新气味增加,从而提高超高压泡菜的香味品质。

    • 鱼丸中DHA含量测量不确定度评定

      2015(11):234-239.

      摘要 (6) HTML (0) PDF 0.00 Byte (0) 评论 (0) 收藏

      摘要:对采用气相色谱内标法测定鱼丸中的二十二碳六烯酸(DHA)含量的测量不确定度进行评定。通过建立测定过程中各分量的数学模型,分析、识别不确定度来源。其不确定度主要来源于校正因子、样品称量、十一碳酸甘油三酯内标溶液、重复测定、回收率等因素。在对各不确定度分量进行量化的基础上,合成得到测定结果的标准不确定度。当鱼丸的DHA含量为170.2 mg/100 g时,其合成标准不确定度和扩展不确定度分别为2.7 mg/100 g和5.4 mg/100 g。重复测定引入的不确定度分量对总不确定度的贡献最大。十一碳酸甘油三酯内标溶液浓度及添加体积、回收率、校正因子带来的不确定度分量也不容忽视。试样称量对总不确定度的贡献最小。本研究结果为采用该方法测定鱼丸中DHA含量提供理论依据。

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