建立了柱后衍生高效液相色谱法同时检测鸡蛋中莫能菌素和盐霉素残留量的方法.采用ZORBAX SBC18(4.6 mm×250 mm,i.d,5μm)色谱柱,选择甲醇/5%冰乙酸(体积比90:10)为流动相,紫外检测波长为520 nm.莫能菌素和盐霉素在柱后分离后与衍生试剂1(硫酸)和衍生试剂2(香草醛)在不同的反应器中先后分别发生反应.在鸡蛋中添加莫能菌素和盐霉素的量分别为0.1/0.2μg/g、0.2/0.5μg/g、0.5/1.0μg/g时,莫能菌素的回收率为84.9%～92.1%,RSD为1.56%～2.17%;盐霉素的回收率为80.8%～91.4%,RSD为1.66%～3.47%.该方法灵敏、准确,适合于鸡蛋中微量莫能菌素和盐霉素残留量的测定.